Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem:
http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2746| Título : | Purification and Characterization of the Membrane-Bound Quinoprotein Glucose Dehydrogenase of Gluconacetobacter diazotrophicus PAL 5 |
| Creador: | Sará Páez Martin |
| Nivel de acceso: | Open access |
| Palabras clave : | Proteínas Bacterianas - química Proteínas Bacterianas - aislamiento y purificación Transporte de Electrón Gluconacetobacter - enzimología Glucosa Deshidrogenasas - química Glucosa Deshidrogenasas - aislamiento & purificación Proteínas de la Membrana - Química Proteínas de Membrana - aislamiento & purificación Especificidad por Sustrato Bacterial Proteins - chemistry Bacterial Proteins - isolation & purification Electron Transport Gluconacetobacter - enzymology Glucose Dehydrogenases - chemistry Glucose Dehydrogenases - isolation & purification Membrane Proteins - chemistry Membrane Proteins - isolation & purification Substrate Specificity Gluconacetobacter diazotrophicus Pirroloquinolina quinona (PQQ) Limitada a la membrana Glucosa deshidrogenasa (GDHm) 2,6-Diclorofenolindofenol (DCPIP) Gluconacetobacter diazotrophicus Pyrroloquinoline quinone (PQQ) Membrane-bound glucose dehydrogenase (GDHm) 2,6-Dichlorophenolindophenol (DCPIP) |
| Descripción : | Las bacterias del ácido acético oxidan un gran número de sustratos, tales como alcoholes y azúcares, usando diferentes enzimas que están ancladas a la membrana. En particular, Gluconacetobacter diazotrophicus se distingue por su actividad de fijación de N2 en condiciones de alta aireación. Ga. Diazotrophicus es un endofito verdadero que también tiene enzimas unidas a membrana para oxidar azúcares y alcoholes. Aquí se informó de la purificación y caracterización de la membrana unida glucosa deshidrogenasa (GDHm), una oxidorreductasa de Ga. Diazotrophicus. GDHm se solubilizó y se purificó por métodos cromatográficos. La GDHm purificada era monomérica, con una masa molecular de 86 kDa. Se identificó el grupo prostético como pirroloquinolina quinona, cuyo estado redox se redujo. GDHm mostró un pH óptimo de 7,2, y su punto isoeléctrico fue 6,0. Esta enzima oxidó preferentemente D-glucosa, 2-desoxi-D-glucosa, D-galactosa y D-xilosa; Su afinidad hacia la glucosa fue diez veces mayor que la de E. coli GDHm. Finalmente, Ga. Diazotrophicus GDHm fue capaz de reducir quinonas tales como Q1, Q2 y decilubiquinona; Esta actividad fue completamente abolida en presencia de concentraciones micromolares del inhibidor, myxotiazol. Por lo tanto, nuestro método de purificación produjo un GDHm altamente purificado cuyos parámetros moleculares y cinéticos se determinaron. Se discuten las posibles implicaciones de la actividad de GDHm en el mecanismo para reducir microorganismos competidores, así como su participación en el sistema respiratorio de Ga. Diazotrophicus. Acetic acid bacteria oxidize a great number of substrates, such as alcohols and sugars, using different enzymes that are anchored to the membrane. In particular, Gluconacetobacter diazotrophicus is distinguished for its N2-fixing activity under high-aeration conditions. Ga. diazotrophicus is a true endophyte that also has membrane-bound enzymes to oxidize sugars and alcohols. Here we reported the purification and characterization of the membrane-bound glucose dehydrogenase (GDHm), an oxidoreductase of Ga. diazotrophicus. GDHm was solubilized and purified by chromatographic methods. Purified GDHm was monomeric, with a molecular mass of 86 kDa. We identified the prosthetic group as pyrroloquinoline quinone, whose redox state was reduced. GDHm showed an optimum pH of 7.2, and its isoelectric point was 6.0. This enzyme preferentially oxidized d-glucose, 2-deoxy-d-glucose, d-galactose and d-xylose; its affinity towards glucose was ten times greater than that of E. coli GDHm. Finally, Ga. diazotrophicus GDHm was capable of reducing quinones such as Q1, Q2, and decylubiquinone; this activity was entirely abolished in the presence of micromolar concentrations of the inhibitor, myxothiazol. Hence, our purification method yielded a highly purified GDHm whose molecular and kinetic parameters were determined. The possible implications of GDHm activity in the mechanism for reducing competitor microorganisms, as well as its participation in the respiratory system of Ga. diazotrophicus, are discussed. © 2015, Springer Science+Business Media New York. |
| Colaborador(es) u otros Autores: | Contreras-Zentella Martha, Gómez-Manzo Saúl, González-Valdez Alejandra Abigail, Gasca-Licea Rolando, Mendoza-Hernández Guillermo, Escamilla José Edgardo, Reyes-Vivas Horacio |
| Fecha de publicación : | 2015 |
| Tipo de publicación: | Artículo |
| Formato: | |
| Identificador del Recurso : | 10.1007/s10930-014-9596-4 |
| Fuente: | Protein Journal 34(1):48 - 59 |
| URI : | http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2746 |
| Idioma: | eng |
| Aparece en las colecciones: | Artículos |
Ficheros en este ítem:
No hay ficheros asociados a este ítem.
Los ítems de DSpace están protegidos por copyright, con todos los derechos reservados, a menos que se indique lo contrario.