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Título :	Determinación de la actividad de la esfingosina-1-fosfato-liasa mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas de impacto electrónico Determination of sphingosine-1-phosphate lyase activity by gas chromatography coupled to electron impact mass spectrometry
Creador:	Reina E
Nivel de acceso:	Open access
Palabras clave :	Aldehído-Liasas - análisis Aldehído-Liasas - metabolismo Aldehídos - análisis Aldehydes - metabolismo Animales Línea Celular Cromatografía de Gases y Espectrometría de Masas - métodos Lisofosfolípidos - metabolismo Ratones Sensibilidad y Especificidad Esfingolípidos - metabolismo Esfingosina -análogos & derivados Esfingosina - metabolismo ldehyde-Lyases - analysis Aldehyde-Lyases - metabolism Aldehydes - analysis Aldehydes - metabolism Animals Cell Line Gas Chromatography-Mass Spectrometry - methods Lysophospholipids - metabolism Mice Sensitivity and Specificity Sphingolipids - metabolism Sphingosine - analogs & derivatives Sphingosine - metabolism Fosfato de Deoxypyridoxine FTY720 Pentadecanal Pentafluorobenzyloxime Esfinganina-1-fosfato Esfingolípidos Deoxypyridoxine phosphate FTY720 Pentadecanal Pentafluorobenzyloxime Sphinganine-1-phosphate Sphingolipid
Descripción :	La esfingosina-1-fosfato-liasa (SGPL1) es la última enzima en el catabolismo de esfingolípidos. Cataliza la escisión retroaldólica de fosfatos de base de cadena larga en fosfoetanolamina y un aldehído graso. En este artículo informamos sobre un procedimiento fácil y sensible para determinar la actividad SPL. Los ensayos usan C _ {17} - esfinganina - 1 - fosfato como sustrato y el producto aldehído, pentadecanal, se cuantifica como su derivado de pentafluorobenciloxima por GC - MS. La derivatización del pentadecanal se realiza como una reacción en una etapa, y el producto de oxima se inyecta directamente para el análisis de GC-MS sin ninguna purificación adicional. La adquisición en modo de monitorización de iones seleccionados permite una sensibilidad muy alta, con un límite de detección de 281fmol. El ensayo es lineal tanto con la concentración de proteína como con el tiempo de incubación de hasta 20 μg y 40 minutos, respectivamente. El valor K (m) obtenido (6 μM) es similar al del sustrato natural fosfato-1-fosfato. Usando este método, FTY720 y fosfato de desoxipiridoxina inhibieron SPL con potencias similares a las reportadas Sphingosine-1-phosphate lyase (SGPL1) is the last enzyme in the catabolism of sphingolipids. It catalyzes the retroaldolic cleavage of long chain base phosphates into phosphoethanolamine and a fatty aldehyde. In this article we report on an easy and sensitive procedure to determine SPL activity. The assays uses C17-sphinganine-1-phosphate as substrate and the aldehyde product, pentadecanal, is quantified as its pentafluorobenzyloxime derivative by GC - MS. Derivatization of pentadecanal is performed as a one-step reaction, and the oxime product is directly injected for GC - MS analysis without any further purification. Acquisition in selected ion monitoring mode allows very high sensitivity, with a limit of detection of 281fmol. The assay is linear with both protein concentration and incubation time up to 20μg and 40min, respectively. The K(m) value obtained (6μM) is similar to that for the natural substrate sphingosine-1-phosphate. Using this method, FTY720 and deoxypyridoxine phosphate inhibited SPL with similar potencies to those reported
Colaborador(es) u otros Autores:	Camacho L Casas J Van Veldhoven PP Fabrias G.
Fecha de publicación :	2012
Tipo de publicación:	Artículo
Formato:	pdf
Identificador del Recurso :	10.1016 - j.chemphyslip.2012.01.001
Fuente:	Chem Phys Lipids 165(2):225-231
URI :	http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2270
Idioma:	eng
Aparece en las colecciones:	Artículos

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