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http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2195| Título : | Cloning, sequencing and functional expression of cytosolic malate dehydrogenase from Taenia solium: Purification and characterization of the recombinant enzyme |
| Creador: | Nava Gabriela |
| Nivel de acceso: | Open access |
| Palabras clave : | Secuencia de aminoácidos Animales Secuencia de bases Dicroísmo circular Clonación Molecular Citosol - enzimología ADN, complementario - química Estabilidad de la enzima Regulación Enzimológica de la Expresión Génica Concentración de iones de hidrógeno Focalización Isoeléctrica Cinética Malato deshidrogenasa - química Malato deshidrogenasa - genética Malato deshidrogenasa - aislamiento & purificación Malato deshidrogenasa - metabolismo Datos de secuencia molecular Metabolismo de NAD Proteínas recombinante - química Genética de proteínas recombinante Recombinante de proteínas - aislamiento & purificación Metabolismo de las proteínas recombinante Alineamiento de secuencias Análisis de la secuencia Taenia solium - enzimología Taenia solium genética Amino Acid Sequence Animals Base Sequence Circular Dichroism Cloning, Molecular Cytosol - enzymology DNA, Complementary - chemistry Enzyme Stability Gene Expression Regulation, Enzymologic Hydrogen-Ion concentration Isoelectric Focusing Kinetics Malate Dehydrogenase - chemistry Malate Dehydrogenase - genetics Malate Dehydrogenase - isolation & purification Malate Dehydrogenase - metabolism Molecular Sequence Data NAD - metabolism Recombinant Proteins - chemistry Recombinant Proteins - genetics Recombinant Proteins - isolation & purification Recombinant Proteins - metabolism Sequence Alignment Sequence Analysis Taenia solium - enzymology Taenia solium - genetics Taenia solium Cisticercosis Malato deshidrogenasa Metabolismo Enzima recombinante Clonación Taenia solium Cysticercosis Malate dehydrogenase Metabolism Recombinant enzyme Cloning |
| Descripción : | El fragmento de cDNA, identificado a partir de la base de datos del proyecto del genoma de T. solium, codifica una proteína de 332 restos de aminoácidos con un peso molecular estimado de 36517 Da. La secuencia de codificación completa de una malato deshidrogenasa citosólica de Taenia solium (TscMDH) Para la expresión recombinante, se clonó la secuencia de codificación de longitud completa en pET23a Después de una expresión exitosa y purificación enzimática, se permitió que la electroforesis en gel de isoelectrofocusación confirmara el valor pI calculado en 8,1, deducido de la secuencia de aminoácidos. TscMDH) mostró una actividad MDH de 409 U / mg
En la reducción de oxaloacetato, sin actividad de lactato deshidrogenasa ni selectividad de NADPH. El pH óptimo para la actividad enzimática fue 7,6 para la reducción del oxaloacetato y 9,6 para la oxidación del malato. Los valores de Kcat para oxaloacetato, malato, NAD y NADH fueron 665, 47, 385 y 962 s1, respectivamente. Además, también se informa de una caracterización parcial de la estructura del gen TsMDH después del análisis de un conjunto contig genómico de 1,56 Kb. We report herein the complete coding sequence of a Taenia solium cytosolic malate dehydrogenase (TscMDH). The cDNA fragment, identified from the T. solium genome project database, encodes a protein of 332 amino acid residues with an estimated molecular weight of 36517Da. For recombinant expression, the full length coding sequence was cloned into pET23a. After successful expression and enzyme purification, isoelectrofocusing gel electrophoresis allowed to confirm the calculated pI value at 8.1, as deduced from the amino acid sequence. The recombinant protein (r-TscMDH) showed MDH activity of 409U/mg in the reduction of oxaloacetate, with neither lactate dehydrogenase activity nor NADPH selectivity. Optimum pH for enzyme activity was 7.6 for oxaloacetate reduction and 9.6 for malate oxidation. Kcat values for oxaloacetate, malate, NAD, and NADH were 665, 47, 385, and 962s-1, respectively. Additionally, a partial characterization of TsMDH gene structure after analysis of a 1.56Kb genomic contig assembly is also reported. © 2011 Elsevier Inc. |
| Colaborador(es) u otros Autores: | Laclette Juan P Bobes Raúl Carrero Julio C Reyes Vivas Horacio Enriquez Flores Sergio Mendoza Hernández Guillermod Plancarte Agustín |
| Fecha de publicación : | 2011 |
| Tipo de publicación: | Artículo |
| Formato: | |
| Identificador del Recurso : | 10.1016/j.exppara.2011.03.008 |
| Fuente: | Experimental Parasitology 128(3):217 - 224 |
| URI : | http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2195 |
| Idioma: | eng |
| Aparece en las colecciones: | Artículos |
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